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    國產液相色譜儀分離測定尿中肌酐和尿酸成分
    作者:氣相色譜儀廠家 來源:液相色譜儀廠家 日期:2014-11-3 10:38:21
    1 實驗部分

    1.I 儀器和試劑:高效國產液相色譜儀 ,51o型輸液泵及 U6K進樣器(Waters公 司,美國),SPD-2A型紫外檢測(日本 島津),3O66型筆式記 錄儀(重慶儀表總廠)  色譜柱 :150哪nx4 6哪n不銹鋼柱填充本室臺成的聚氧乙烯交聯  氨基丙基固定相(5  )。尿酸(Slg~ 公司)和肌酐 (Merck公 司)均為生化試劑 ,實驗用水 為二次蒸餾水 ,其它試 劑為分析純。流動相用耐酸玻璃砂漏斗(  )過濾并脫氣 。

    1.2 標準溶液的制備 肌酐和尿酸標準儲備渡(1 g/L)按文獻方法制備 ,可在冰箱中保存一個月。肌酐和屎酸標 準溶液及混臺標準溶液(1∞ r  L):取適量體積的相應標準儲備液 ,用水稀釋至所需濃度 ,使用前新鮮配制 。

    1.3 分析條件 流動相 :0.ol rad/L磷酸鹽緩沖溶液 10%甲醇,pH=4.81。流速 1 mIJmin。檢測波長 235 ran靈敏度 0.16 Atrrs(輸出電壓 10 mY)。色譜分析溫度為室溫,以溶劑峰測定死時間。

    1.4 定性測定方法 采用外標法 ,以峰高定量。

    2 結果與討論

    2.1 檢潮波長的選擇 在 220 280-皿波長范圍測定肌酐和尿酸的紫外吸收,兩物質均在 235舢 有高吸收故確定檢測波長 235 IlIn。

    2.2 流動相的選擇 因分析 Ig標為尿中肌酐和尿酸 ,所以選擇流動相含 0.01 rad/L磷酸鹽緩沖液,使分析條件較溫和?疾觳煌 pH的流動相對兩物質分離的影響 ,在 pH=4.81附近,肌酐和尿酸分 離度好。流動相中甲醇濃度對分離也有影響,選擇 10%的甲醇含量時,兩物質有好的分離度。在所選擇的分析條件下 ,無雜質峰干擾肌酐和尿酸的檢測。

    2.3 工作 曲線、檢測限及線性范 圍 將不 同濃度的標準溶液分別進樣 ,進樣體積 10  ,以峰高對進樣量 (塢作線性回歸如下 :肌酐 y:2.29+161.75z,相關系數 r= 1.0000;屎酸 Y=4.14+172.8 z,相關系數 r0.9999。用逐級稀釋法,在 0.02AUFS時 ,按信噪 比為 3倍計測得檢測限 :肌酐,2  L-尿酸 ,3  Lo線性范圍肌酐 ,2~1×1  L;屎酸 ,3~1×1  /Lo

    2.4 回收辜及 精 密度  將 不 同量 的肌 酐 和屎 酸標 準溶 液加 人稀 釋 的尿樣 作色譜 分 析 ,回收率 :肌酐102.0% .RSD=3.00go(n=8);尿酸,96.27% ,RSD=1.97%(n:8)。

    2.5 樣 品測定 取正常人新鮮屎樣用水稀釋 10倍 ,進樣 2  ,對 8份尿樣進行分析,每份平行測定 3~5次R蚰 <6%。樣品攫I定結果:肌酐,0.78—1.77 g/L;尿酸 0.28—0 63 k 樣品測定結果與文獻報道的正常范圍相符 ,色譜分析時問不超過 6 ndn。

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